Развернутая серология ревматоидного артрита (АКА и АПФ и АЦЦП/anti-CCP и РФ)
Цена. 4000.00 руб.
Биоматериал. Пробирка с красной крышкой
Сроки исполнения. 7 дн.
АКА - Серологический маркер ревматоидного артрита
Антикератиновые антитела относят к семейству антицитруллиновых антител, направленных против аминокислоты цитруллина. Цитруллин образуется в составе белков при ряде физиологических процессах, в частности при апопотозе. При ревматоидном артрите в воспаленной синовиальной оболочке активны ряд ферментов нейтрофилов (пептидил-аргининдезаминазы), которые модифицируют ряд белков соединительной ткани и фибрин. Аутоиммунная реакция против цитруллинированных антигенов приводит к появлению антикератиновых и других антицируллиновых антител.
Антикератиновые антитела связываются с эпителиальным белком филаггрином, который участвует в сборке кератиновых филаментов в плоском многослойном эпителии. Эпителиальный филаггрин в ходе синтеза подвергается цитруллинированию с помощью конститутивного эпителиального фермента пептидил аргинин дезаминазы (PAD) в результате чего, в структуре белка формируются остатки цитруллина, похожие на цитруллин-содержащие антигены в воспалительном суставе.
Антикератиновые антитела являются первыми изученными аутоантителами из семейства антицитуллиновых аутоантител (см. антитела к циклическому цитруллиновому пептиду код 01.02.15.080). Иногда антикератиновые антитела и редко используемый в настоящее время антиперинуклеарный фактор относят к антифилаггриновым антителам. Как и другие антицитруллиновые антитела они появляются в сыворотке крови пациентов за годы до развития заболевания.
Причиной появления антицитруллиновых антител при ревматоидном артрите является высокая активность нейтрофильного фермента PAD в синовиальной мембране пораженных суставов. В результате воспаления в белках синовиальной оболочки и фибрине образуется множество остатков цитруллина, которые становятся мишень аутоантител. Предполагается, что накопление цитруллинированного фибрина и локальная продукция антител к цитруллинированным пептидам могут участвовать в механизмах поддержания местного воспалительного процесса. Среди пациентов с установленным ревматоидным артритом, присутствие АКА ассоциировано с тяжестью эрозивных поражений суставов, риском быстрой инвалидизации и высокой концентрацией циркулирующих иммунных комплексов.
Подготовка к исследованию:
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется забор крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.
Показания к назначению теста:
Диагностика и дифференциальная диагностика ревматоидного артрита
Оценка риска деструкций суставов
Материал для исследования: сыворотка крови.
Метод определения: реакция непрямой иммунофлюоресценции с многослойным плоским эпителием пищевода крысы.
Сроки исполнения: 7 рабочих дней
Единицы измерения: титр
Референсные значения: <1:10
Выявление антикератиновых антител имеет большое значение для ранней диагностики ревматоидного артрита. Антикератиновые антитела отмечаются у 45% пациентов с серопозитивным ревматоидным артритом, при серонегативном артрите чувствительность составляет около 20-30%. Выявление антикератиновых антител обладает высокой специфичностью, составляющей 90-95%.
Среди пациентов с установленным ревматоидным артритом, присутствие АКА ассоциировано с тяжестью эрозивных поражений суставов и риском быстрой инвалидизации.
Anti-perinuclear factor (Anti-citrullinated protein antibody)Исследуемый материал: сыворотка кровиАнтиперинуклеарный фактор (АПФ) – разновидность аутоантител, направленных против белков, содержащих цитруллин. Обнаружение их в крови свидетельствует о наличии ревматоидного артрита. К антителам этого же вида относятся антикератиновые антитела (АКА) и антитела к центральному цитруллинсодержащему пептиду (АЦЦП). Они часто определяются одновременно с АПФ и также являются маркерами данного заболевания.
Ревматоидный артрит – хроническое системное заболевание аутоиммунной природы. Проявляется воспалением, болью, скованностью, деформацией и разрушением пораженных суставов. В патологический процесс могут вовлекаться любые суставы. Заболевание может развиваться быстро, прогрессировать, вызывать значительные изменения в суставах, или же в течение многих лет пребывать в ремиссии (период временного ослабления). При отсутствии своевременного лечения ревматоидный артрит приводит к ограничению физической активности, инвалидности и даже сокращению срока жизни, поэтому его ранняя диагностика и незамедлительное начало лечения очень важны.
Антиперинуклеарный фактор выявляется с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции в кератогиалиновых гранулах, окружающих ядро клеток эпителия щеки человека. При этом под микроскопом определяется специфическое свечение округлых гранул, расположенных вокруг ядра.
Для диагностики ревматоидного артрита используется еще один показатель – ревматоидный фактор (РФ). Он обладает большей чувствительностью, чем АПФ, но специфичность его ниже. При серонегативном ревматоидном артрите ревматоидный фактор в крови не обнаруживается, поэтому для диагностики этого вида ревматоидного артрита предпочтительнее метод определения АПФ. Чувствительность АПФ составляет 53-68 %, специфичность – 91-95 %.
АПФ, определяемый одновременно с анализом на антикератиновые антитела, имеет значение в диагностике раннего ревматоидного артрита. На ранних стадиях заболевания АПФ и АКА встречаются чаще ревматоидного фактора.
Отмечено, что при высокой активности ревматоидного артрита и агрессивном его течении в крови чаще обнаруживаются антицитруллиновые антитела.
У людей с другими системными заболеваниями, а иногда и у здоровых людей, АПФ в ряде случаев может быть положительным. Поэтому подход к диагностике должен быть комплексным, а результаты лабораторных исследований должны оцениваться вместе с анамнезом, симптомами заболевания, а также с данными других анализов и методов обследования.
- Диагностика раннего ревматоидного артрита (M05-M06), в том числе серонегативного (при отрицательном показателе ревматоидного фактора);
- симптомы ревматоидного артрита (отечность, болезненность суставов кистей, скованность в движении воспаленных суставов, повышение температуры тела, подкожные ревматические узелки);
- боли в суставах неясного происхождения (M00-M25);
- обследование пациента с рентгенологическими признаками эрозий суставных поверхностей костей;
- составление прогноза ревматоидного артрита.
Основной диагностический маркер ревматоидного артрита, определение АЦЦП необходимо для постановки критериального диагноза ревматоидный артрит.
Антитела к циклическому цитруллиннированному пептиду (АЦЦП) – cyclic citrullinated peptide – CCP или anti-citrullinated peptide antibody (ACPA), англ. направлены против коротких последовательностей измененных белков воспаленной синовиальной оболочки при ревматоидном артрите (РА). АЦЦП входят в семейство "антицитруллиновых антител", наряду с другими аутоантителами: антикератиновыми антителами и антителами к модифицированному виментину (MCV). Причиной появления всех антицитруллиновых антител является воспалительная модификация ряда белков (фибрина, альфа-енолазы, виментина, и т.д.) в синовиальной оболочке суставов при ревматоидном артрите, с образованием в структуре белков остатков аминокислоты цитруллина. Исследования голландского профессора Walther vanVenrooij позволили исследовать спектр эпитопов антицитруллиновых антител и разработать уникальный тест, с использование циклического цитруллинового пептида, который напоминает антиген всех антицитруллиновых антител. Линейные цитруллиновые пептиды и циклические петиды на основе белка филлагрина использовались в тест системах первого поколении. Тест системы первого поколения несколько менее чувствительны по сравнению со вторым поколением тест систем АЦЦП2/ССР2, которые основаны на улучшенной структуру антигена – «дизайнерский антиген». Иммуноферментные тест-системы АЦЦП второго поколения стали золотым стандартом выявления антител к циклическому цитуруллиновому пептиду в клинических лабораториях.
Метод второй генерации для выявления АЦЦП антител позволяет обнаружить антитела у 70-75% пациентов РА. По чувствительности при РА выявление АЦЦП сопоставимо с чувствительностью обнаружения ревматоидного фактора. В тоже время, выявление ревматоидный фактор (РФ) недостаточно специфично для РА. РФ выявляется при многих аутоиммунных и инфекционных заболеваниях, низкие титры РФ в пожилом возрасте могут отмечаться у 10-15% лиц не больных РА. В отличие от РФ, специфичность обнаружения АЦЦП превосходит 95%. Антитела АЦЦП не встречаются у здоровых лиц, а вероятность обнаружения АЦЦП при других воспалительных поражениях суставов не превышает 2-3% случаев. Среднее содержание у здоровых доноров крови в 10 раз меньше, чем рекомендуемая производителем граница нормы.
Большим преимуществом антител АЦЦП/CCP является их появление до задолго до начала клинических проявлений заболевания. Популяционные исследования, посвященные времени появления аутоантител АЦЦП в ходе РА, показали, что АЦЦП могут быть обнаружены задолго до развития клинических симптомов заболевания. До появления клинических симптомов заболевания в 34% случаев были обнаружены антитела к циклическому цитруллиновому пептиду. У 19% здоровых на момент обследования людей, был обнаружен ревматоидный фактор класса IgM (РФ IgM), причем в нескольких случаях появление антител предсказывало РА за 20 лет до появления симптомов заболевания. Частота обнаружения антител значительно нарастала к моменту, соответствующему 1,5 годам до постановки диагноза РА. После выявления минимального диагностического титра содержание антител обычно увеличивалось вплоть до срока постановки диагноза (см. рис.)
Таким образом, раннее выявление АЦЦП в дебюте заболевания, учитывая высокую клинико-диагностическую специфичностью этого показателя, делает АЦЦП крайне важным методом диагностики в дебюте суставного синдрома. Антитела к цитруллиновым антигенам могут отмечаться у многих пациентов у которых с момента появления симптомов симметричного артрита мелких суставов кисти и утренней скованности не прошло 2-3 недель и ревматоидный фактор еще отсутствует.
Антитела к АЦЦП не только обнаруживаются на ранних стадиях РА, но и отмечаются у больных РА с быстрым рентгенологическим прогрессированием. Результаты анализа литературных данных показывают что антитела к циклическому пептиду позволяют предсказать развитие деструкций приблизительно у 80% пациентов с РА, и в сочетании с РФ, представляют важный инструмент для раннего распознавания больных РА с неблагоприятным прогнозом заболевания уже на этапе установления диагноза. У пациентов с тяжелым течением РА, у которых выявлены высокие титры АЦЦП, может быть лучше эффект назначения анти-В клеточной терапии. Хорошие клинико-диагностические характеристики выявления АЦЦП/APCA позволили включить их международные критерии ревматоидного артрита ACR/EULAR 2010 года.
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется забор крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.
Ранняя диагностика суставного синдрома
Обследование пациентов с симметричным артритом кистей и стоп;
Дифференциальная диагностика утренней скованности;
Дифференциальная диагностика ревматоидного артрита;
Оценка прогноза развития деструкций суставов при ревматоидном артрите
Материал для исследования: сыворотка крови.
Метод определения: иммуноферментный анализ с использованием циклического цитруллинового пептида 2 поколения, IgG.
Сроки исполнения: 5 рабочих дней
Референсные значения:<30 RU/ml - антител не обнаружено; 30-90 RU/ml - низкие концентрации антител; >90 RU/ml - высокая концентрация антител
Выявление антител к циклическому цитруллиновому пептиду (АЦЦП/CCP/ACPA) значительно повышает вероятность диагноза ревматоидный артрит. На этапе раннего симметричного артрита обнаружение АЦЦП совместно выявлением ревматоидного фактора обладает максимальной чувствительностью составляющей 80-85%. Анализ содержания антител и сопоставление с характером артрита и воспалительной реакции рекомендуется проводить в соответствии с критериями диагностики ревматоидного артрита ACR/EULAR2010 г.
Отрицательный результат исследования снижает вероятность заболевания и практически исключает вероятность тяжелого РА. Анализ результатов определения аутоантител целесообразно проводить совместно с оценкой содержания ревматоидного фактора, определения антинуклеарного фактора на НЕр2 клетках и типирования HLAB-27. Большинство пациентов с антителами к цитруллинированному виментину также положительны в отношении антител к модифицированному цитруллиновому виментину (MCV).
Критериальный серологический маркер ревматоидного артрита, также используется в диагностике криоглобулинемии и синдрома Шегрена.
Ревматоидный фактор (РФ) представляет собой аутоантитело, реагирующее с Fc-фрагментом молекулы иммуноглобулина IgG. При ревматоидом артрите РФ был открыт Waaler E. в 1940 году и ревматоидный фактор стал одним из первых антител, тестирование которых стало использоваться в диагностике аутоиммунных заболеваний. Выявление РФ долгое время служило основным лабораторным методом диагностики ревматоидного артрита (РА) и послужило основанием для выделения двух его основных клинико-лабораторных разновидностей: серонегативного и серопозитивного РА. Более того, отсутствие РФ при ряде воспалительных артритов, позволяет выделить клиническую группу серонегативных спондилоартропатий. В настоящее время, обязательное иммунологическое обследования пациентов с ревматоидным артритом расширилось добавлением антител к циклическому цитруллиновому пептиду и острофазовых маркеров.
Основной мишенью ревматоидного фактора является эпитоп Ga, расположенный в Сg2-Сg3 районе тяжелой цепи молекулы IgG подклассов IgG1, IgG2, IgG4, недалеко от сайта связывания со стафилококковым протеином А. К семейству ревматоидных факторов причисляют антитела против IgG, представленные основными классами иммуноглобулинов – IgG, IgM и IgA. Хотя ревматоидный фактор может быть представлен любым классом иммуноглобулинов, но агглютинационные тесты предпочтительно выявляют IgM-РФ. В латексном тесте аггрегированный человеческий IgG прикреплен к латексным частицам, которые агглютинируют в присутствии ревматоидного фактора. Ревматоидный фактор класса IgG отмечается при васкулитах, сопутствующих РА и синдрому повышенной вязкости крови, поскольку он может участвовать в образовании само-ассоциирующихся иммунных комплексов. У больных с IgA-РФ отмечается высокая активность ревматоидного артрит. Для выявления ревматоидного фактора класса IgA используется метод иммуноферментного анализа.
В качестве популяционной нормы рекомендуется рассматривать концентрации РФ ниже 20 IU/мл. Частота выявления концентраций РФ, превышающих 20 IU/мл, у здоровых людей среднего возраста составляет около 3% и увеличивается до 10-15% у пожилых старше 65 лет. Концентрация РФ в сыворотке крови больного, превышающая 40 IU/мл, должна рассматриваться как высокая и является высокоспецифичной для диагностики РА. Обнаружение титров РФ более 40-50 IU/мл указывает на высокий риск развития эрозивного артрита. У тех лиц, у которых был выявлен высокий титр РФ, отмечается риск развития РА, так как обнаружение диагностических титров РФ может предшествовать клиническим проявлениям заболевания с отрывом в несколько лет.
При ревматоидном артрите РФ обладает достаточно высокой чувствительностью, и отмечается у 60-80% больных этим заболеванием. Однако в дебюте заболевания, на этапе раннего артрита РФ обнаруживается менее чем у 25% больных, что значительно снижает его значение для ранней диагностики этого заболевания. Однократное определение РФ на ранней стадии РА, принесшее отрицательный результат, недостаточно для того чтобы исключить серопозитивную клинико-иммунологическую форму РА. Если диагноз РА подозревается или даже клинически подтвержден при отрицательном результате теста по определению РФ требуются повторные определения его титра каждые 6 или 12 месяцев. Этот срок приблизительно соответствует времени обновления пула плазматических клеток, способных синтезировать аутоантитела. Если же будет получен положительный результат, то нет повода повторять определение РФ с течением времени, так как титры аутоантител плохо отражают активность заболевания. Значение повторных определений содержания РФ для контроля за течением заболевания небольшое значение, и значительно уступает определению СРБ и СОЭ для оценки системного воспаления. Снижение титра РФ в плазме крови при успешной терапии может отчасти объясняться цитостатическим эффектом применяемых препаратов. У больных РА возможна сероконверсия как в одну, так и в другую сторону в зависимости от активности и длительности заболевания, а также от проводимого лечения. Сероконверсия из серопозитивной в серонегативную группу встречается редко и обычно сопутствует полной клинической ремиссии заболевания.
Кроме низкой встречаемости РФ в дебюте заболевания, очевидным недостатком РФ в качестве маркера РА является его сравнительно низкая специфичность, которая не превышает 60%. Фактически, это означает что каждый 3-4 положительный тест обнаруживается у больного без РА. Так частота выявления концентраций РФ, превышающих 20 МЕ/мл, у здоровых людей среднего возраста составляет около 3% и увеличивается до 10-15% у пожилых старше 65 лет. Диагностические уровни РФ часто встречаются при синдроме Шегрена, гранулематозе Вегенера, аутоиммунных поражениях печени, СКВ, криоглобулинемии, реже при многих других аутоиммунных заболеваниях, а также хронических инфекциях, в частности подостром септическом эндокардите, туберкулезе, вирусном гепатите С. К обнаружению ревматоидного фактора может привести появление аллотипических антител, которые индуцируются при беременности или после гемотрансфузий.
Подготовка к исследованию:
Специальная подготовка не требуется. Рекомендуется забор крови не ранее чем через 4 часа после последнего приема пищи.
Показания к назначению теста:
Ранняя диагностика суставного синдрома (боль, припухлость, покраснение, утренняя скованность);
Дифференциальная диагностика при неспецифических ревматических жалобах;
Дифференциальная диагностика артритов;
Дифференциальная диагностика васкулитов и криоглобулинемии;
Диагностика и дифференциальная диагностика первичного сухого синдрома (синдрома Шегрена)
Материал для исследования: сыворотка крови.
Метод определения: агглютинация латекса
Сроки исполнения: 3-5 рабочих дней
Единицы измерения: МЕ /мл
Референсные значения: <20 МЕ/мл
Определение РФ входит в международные классификационные критерии ревматоидного артрита ACR/EULAR2010 года, высокие титры РФ могут использоваться для подтверждения диагноза рематоидный артрит. В диагностике ревматоидного артрита целесообразно использовать выявление ревматоидного фактора совместно с исследование АЦЦП и других антицитруллиновых антител.
В тоже время, его обнаружение не позволяет доказать РА при атипичной клинической картине, а отсутствие РФ в сыворотке больного не позволяет исключить диагноза РА. Так симметричный полиартрит, характерный для РА, отмечается у больных СКВ, синдромом Шегрена, полимиозитом, вирусными инфекциями и другими заболеваниями, также часто сопровождающимися обнаружением РФ в сыворотке. В то же время, РФ встречается при других заболеваниях соединительной ткани и практически всегда сопровождается АНА. Так при синдроме Шогрена выявление у больного РФ обычно сопутствует RoSS-A, а при волчанке РФ обнаруживается у больных с антителами к дсДНК. Выявление изолированных высоких титров РФ у пациента, у которого нельзя исключить диагноз ревматоидного артрита, может потребовать выявления ревматоидного фактора класса IgA. Для диагностики первичного сухого синдрома (синдрома Шегрена) выявление ревматоидного фактора должно сопровождаться определением антинуклеарного фактора на НЕр2 клетках, иммуноблота антинуклеарных антител.
Выявление РФ у пациента с гемораггическим васкулитом указывает на высокую вероятность эссенциальной смешанной криоглобулинемии на фоне инфекционного или ревматического заболеваиния. В этом случае для подтверждения диагноза рекомендуется исследовать криоглобулины.
